A víz, a talaj és a levegő mikrobiológiai módszerei

A mikroorganizmusok a legkisebb, többnyire egysejtű, széles körben elterjedt lények. Ezek megtalálhatók minden környezetben (levegő, talaj, víz), az emberi testben és az állatokban, a növényekben.

A minőségi sokféleség és a mikroorganizmusok száma elsősorban a táplálkozási vegyületektől függ. Azonban a nedvesség, a hőmérsékleti rendszer, a levegőztetés, a napsugarak hatása és más tényezők is nagy jelentőséggel bírnak.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. A természetes média egészségügyi-mikrobiológiai vizsgálatának módszerei lehetővé teszik a kórokozó mikroorganizmusok jelenlétének azonosítását, azok számának meghatározását és a kapott eredményekkel összhangban a fertőző betegségek kiküszöbölésére vagy megelőzésére irányuló intézkedéseket. Ezenkívül kvantitatív számvitel szükséges az ökoszisztémák modellezéséhez és a természeti folyamatok kezelésének alapelveinek kidolgozásához. . Tekintsük tovább, milyen módszereket alkalmaznak a mikrobiológiai kutatások .

talaj

A tudósok a fertőző betegségek terjedésének egyik lehetséges módját tekintik. A beteg emberek vagy állatok kiválasztódásai során a patogén mikroorganizmusok behatolnak a talajba. Néhány közülük, különösen a spóra, sokáig túlléphet a földön (néha több tíz évig). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Az ilyen veszélyes fertőzések kórokozói, mint például a tetanusz, az antrax, a botulizmus stb. Bejutnak a talajba A talaj egészségügyi-mikrobiológiai vizsgálatának módszerei lehetővé teszik a "mikrobiális szám" meghatározását (a mikroorganizmusok gramm talajban), valamint az coliindex (E. coli száma) .

Talajelemzés: általános információ

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. A mikrobiológiai talajkutatás módszereinek elsősorban közvetlen mikroszkópiát és sűrű táptalajt kell vetni. A talajban élő mikroorganizmusok és csoportjaik különböznek taxonómiai helyzetükben és ökológiai funkcióikban. A tudományban a "talajbiota" általános kifejezés alatt egyesülnek. A talaj nagyszámú mikroorganizmus élőhelye. Egy gramm talajban 1-10 milliárd sejtje van. Ebben a környezetben a szerves anyagok bomlása különféle szaprofita mikroorganizmusok bevonásával történik.

Mikrobiológiai kutatás mikroszkópos módszere: szakaszok

A környezeti elemzés mintavételezéssel kezdődik. Ehhez használjon korábban tisztított és dörzsölett alkoholos késsel (lapáttal). Ezután elkészül a minta. A következő lépés a sejtek számlálása festett keneteken. Vegyük fontolóra minden egyes szakasz külön-külön.

mintavétel

A szántóföld vizsgálata során rendszerint mintákat vesznek a teljes réteg mélységéből. Először 2-3 cm-t távolítson el a talaj tetejétől, mivel tartalmazhat külföldi mikroflórt. Ezt követően a monolitokat a talaj vizsgált helyéről vesszük. A hossza mindegyiknek meg kell felelnie annak a rétegnek a vastagságához, amelyből mintát kell venni.

A telek 100-200 négyzetméter. M, 7-10 mintát veszünk. Mindegyik súlya körülbelül 0,5 kg. A mintákat alaposan össze kell keverni egy tasakban. Ezután vegyen be egy átlagos mintát, amely kb. 1 kg súlyú. Ezt egy pergamentes (steril) zsákba kell helyezni, amelyet egy szövetzsákba ágyaznak be. A közvetlen elemzés előtt a mintát a hűtőszekrényben tárolják.

Kutatás előkészítése

A kevert talajt a száraz üvegre öntjük. Előzetesen fel kell törölni az alkohollal és égetni az égőn. Spatula segítségével a talajt alaposan elkeverik és egyenletesen lefektetik. Nyilvánvaló, hogy el kell távolítani a gyökereket és más idegen elemeket. Ehhez csipeszeket használnak. A munka előtt a csipesz és a spatula kalcinálódik az égő fölé, és lehűtik.

A talaj apró részeitől az üvegen elosztva apró részleteket veszünk. Műszaki méretben egy porceláncsészében lemérik őket. является специальная обработка образца. A mikrobiológiai vizsgálat mikroszkopikus módszerének kötelező szakasza a minta speciális feldolgozása. Előzetesen két steril lombikot kell előkészíteni. Kapacitásuk nem haladhatja meg a 250 ml-t. 100 ml csapvizet öntünk az egyik lombikba. Ebből 0,4-0,8 ml folyadékot és nedvesítse meg a talaj lógását pépes állapotba. A keveréket 5 percig dörzsölni kell egy ujjal vagy gumibolyával.

Az első lombikból származó vízzel a talajtömeget átvisszük egy üres lombikba. Ezután újra dörzsölni. Ezután a masszát átvisszük a lombikba az égő lángja közelében. A tartályt a talajszuszpenzióval 5 percig rázzuk a szelepen. Ezután kb. 30 másodpercig hagyja eltelni. Erre azért van szükség, hogy a nagy részecskék leülepedjenek. Fél perc elteltével a készítményt előkészítjük.

A sejtek számolása rögzített kenetekre

, разработанному Виноградским. A talaj közvetlen mikroszkópos vizsgálatát a Vinogradsky által kidolgozott mikrobiológiai kutatások szerint végezzük. Az előállított szuszpenzió bizonyos térfogatában számoljuk a mikroorganizmus sejtek számát. A rögzített kenetek tanulmányozása lehetővé teszi a gyógyszerek hosszabb ideig történő megmentését és számítások elvégzését bármely alkalmas időpontban.

A gyógyszer előkészítése a következő. A szuszpenzió egy bizonyos térfogatát (általában 0,02-0,05 ml) egy mikropipettén helyezik el egy dián. Hozzáadunk egy csepp agar-agar oldatot (agaropektin poliszacharid keverékek és a fekete-tengeri barna és vörös tengeri alga kivont agaróz), gyorsan összekeverjük és 4-6 négyzetméteres területen eloszlatjuk. Lásd: A kenetet levegőn szárítjuk és 20-30 percig rögzítjük. Alkohol (96%). Ezután a készítményt desztillált vízzel nedvesítjük, 20-30 percig a karbolikus eritroszin oldatba helyezzük.

A festés után mossuk és levegőn szárítjuk. A sejteket merítési célokkal számolják.

Vetés sűrű médiumon

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. A mikrobiológiai kutatások mikroszkopikus módszerei lehetővé teszik számos mikroorganizmus azonosítását. Ennek ellenére a gyakorlatban a vetés módszere a leggyakoribb. Ennek lényege, hogy a Petri-csészében sűrű közegben a készítmény térfogatát (talajszuszpenzió) vetjük alá.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Ez a mikrobiológiai kutatás lehetővé teszi számunkra, hogy ne csak a mennyiséget, hanem a csoport összetételét, és bizonyos esetekben a mikroszkopikus növényzet fajösszetételét is figyelembe vesszük. A kolóniák számát általában a Petri-csésze alján helyezik el átvilágított fényben. A számlált szakaszban a pontot markerrel vagy tintával helyezzük el.

Vízelemzés

A víztest mikroflórája általában szabályozza a közelben lévő talaj mikrobiális összetételét. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. E tekintetben a víz és a talaj egészségügyi és mikrobiológiai vizsgálatának módszerei különösen gyakorlati jelentőséggel bírnak egy adott ökoszisztéma állapotának tanulmányozásában. A friss tavak általában cocci, rúd alakú baktériumok.

A vízben lévő anaerobok kis mennyiségekben találhatók. Rendszerint a tározók fenekén reprodukálódnak, szilvában, részt vesznek a tisztítási folyamatokban. Az óceánok és a tengerek mikroflóráját főként a sót szerető (halofil) baktériumok képviselik.

Gyakorlatilag nincsenek artézi kutak a mikroorganizmusokban. Ez a talajréteg szűrési képességének köszönhető.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. A mikrobiológiai vízvizsgálat általánosan elfogadott módszerei a mikrobiális szám meghatározása és a colitis vagy coliform index meghatározása. Az első mutató a baktériumok számát 1 ml folyadékban jellemzi. Az coli-index az E. coli jelenléte egy liter vízben, és a kolit-titer a folyadék legkisebb mennyisége vagy maximális hígítása, amelyben még mindig detektálható.

A mikrobiális szám meghatározása

Ez a módszer az egészségügyi mikrobiológiai vízkutatás a következő. 1 ml vízben meghatároztuk a 37 ° C-os hőmérsékleten a hús-agitált agár (a legfontosabb tápközeg) számára képes fakultatív anaerobok és mezofil (köztes) aerobok mennyiségét. A nap folyamán kolóniákat képez, láthatóan 2-5 r növekedéssel. Vagy szabad szemmel.

является посев. A mikrobiológiai vízkutatás ezen módszere a vetés. Minden mintából legalább 2 különböző mennyiség kerül vetésre. A csapvíz elemzésekor minden csészébe 1-0,1 ml tiszta folyadékot és 0,01-0,001 ml szennyezett folyadékot adunk hozzá. A 0,1 ml vagy annál kisebb vetés esetén a folyadékot desztillált (steril) vízzel hígítjuk. Állandóan tízszeres hígításokat készítsen. Mindegyikhez 1 ml-t adunk két Petri-csészéhez.

A hígításokat tápanyag agarral töltötték. Meg kell előzni és 45 ° -ra lehűlni. Erõteljes keverés után a táptalajt vízszintes felületen hagyjuk megszilárdulni. 37 fokban. A terményeket a nap folyamán termesztik. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. A vizsgált mikrobiológiai vízkutatás módszere lehetővé teszi, hogy figyelembe vegyék az eredményeket azokon a lemezeken, ahol a kolóniák száma 30 és 300 között van.

levegő

A mikroorganizmusok tranzitközegének minősül. являются седиментация (оседание) и аспирация. A levegő mikrobiológiai vizsgálatának fő módszerei a szedimentáció (üledékképzés) és az aspiráció.

A légkör mikroflórája feltételesen egy változóra és állandóra van osztva. Az elsőek közé tartoznak az élesztő, a pigmentképző kókuszok, a szóródott bacillák, a rudak és más mikroorganizmusok, amelyek ellenállnak a szárításnak, a könnyű expozíciónak. A változó mikroorganizmusok képviselői, amelyek a szokásos élőhelyükről a levegőbe jutnak, nem tartják sokáig életképességüket.

A nagy megakadások levegőjében a mikroorganizmusok sokkal többek, mint a vidéki területek légkörében. A tengereken túl kevés a baktériumok erdeje. A levegő tisztítását a csapadék: hó és eső teszi lehetővé. Zárt térben a mikrobák sokkal több, mint a nyitott terekben. A számuk a téli időszakban rendszeres sugárzás hiányában nő.

ülepítés

считается простейшим. Ez a mikrobiológiai kutatás mikrobiológiai módszere a legegyszerűbbnek tekinthető. A cseppecskék és az agar felületén lévő részecskék üreges petri-csészében a gravitáció hatására történő leülepedésén alapulnak. A szedimentációs módszer nem határozza meg pontosan a baktériumok számát a levegőben. Az a tény, hogy meglehetősen nehéz elkapni a porrészecskék apró frakcióit és a bakteriális cseppeket egy nyitott csészén. Elsősorban nagy részecskék maradnak a felületen.

Ezt a módszert nem használják a légköri levegő analízisében. Ezt a környezetet a légáramlás sebességének nagy ingadozása jellemzi. Az üledékképzés azonban kifinomultabb műszerek vagy áramforrás hiányában használható.

A mikrobiális szám meghatározását az Omelyansky módszerével végezzük. Ennek megfelelően, 5 percig az agár felületén, amelynek területe 100 négyzetméter. A Cm 10 liter levegőben jelen lévő baktériumok számát oldja.

535. sz. "A mikrobiológiai kutatási módszerek egyesítéséről"

A bakteriológiai elemzés fontos helyet foglal el számos különböző fertőző betegség diagnosztizálására, megelőzésére és kezelésére irányuló klinikai és laboratóriumi tevékenységben. Ezek azonban nem korlátozódnak a környezetvédelmi kutatásokra.

Különös jelentőséggel bír az orvosi intézmények biológiai anyagának bakteriológiai elemzése. Az orvosi intézményekben eltöltött kutatások során felmerült igények merültek fel. A "A mikrobiológiai módszerek kutatásának egyesítéséről" szóló rendelet célja a bakteriológiai elemzés javítása, a mikrobiológiai diagnózis minőségének és hatékonyságának javítása.

A kenetek mikroszkópos vizsgálata nőkben

Ez kulcsfontosságú elemzési módszer a szexuális úton terjedő fertőzések és az opportunista betegségek (opportunista baktériumok által okozott) diagnózisában.

A mikroszkópos elemzés lehetővé teszi a mikroflóra minőségi és mennyiségi összetételének értékelését, a mintavétel helyességének ellenőrzését. Például, a hüvelyi hám jelenléte a cervikális csatornából vett kendőben jelzi a biológiai mintavételi szabályok megsértését.

Érdemes megemlíteni, hogy ebben az esetben a mikrobiológiai vizsgálatot általában bizonyos problémák kísérik. Hozzájárulnak ahhoz a tényhez, hogy a nemi szervek alsó részében általában különböző mikroflóra alakul ki, amely különböző korszakokban változik. A tanulmány hatékonyságának javítása érdekében egységes szabályokat dolgoztak ki.

Vírusfertőzések diagnosztizálása

Ezt RNS és DNS patogének kimutatásával végezzük. Főként a patogén anyag nukleotidszekvenciáinak meghatározásán alapulnak. Ehhez molekuláris próbákat használnak. Ezek mesterségesen előállított nukleinsavak, amelyek kiegészítik a radioaktív címkével vagy biotinnal jelzett vírusosavakat.

A módszer egyik sajátossága egy specifikus DNS-fragmens többszörös másolása, amely magában foglalja a nukleotidpárok több száz (vagy tíz) nukleotidját. A replikáció mechanizmusa (másolás) az, hogy a befejezés csak bizonyos blokkokban kezdődhet. Létrehozásához primereket (primereket) használnak. Ezek szintetizált oligonukleotidok.

A PCR-diagnosztika (polimeráz láncreakció) könnyen elvégezhető. Ez a módszer lehetővé teszi az eredmények gyors elérését kis mennyiségű kóros anyag felhasználásával. A PCR diagnosztika segítségével akut, krónikus és rejtett (rejtett) fertőzések észlelhetők.

Az érzékenységgel ez a módszer előnyösnek tekinthető. Jelenleg azonban a tesztrendszerek nem elég megbízhatóak, ezért a PCR diagnosztika nem tudja teljesen helyettesíteni a hagyományos módszereket.